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如何提高化學轉(zhuǎn)化的效率
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用于轉(zhuǎn)化的DNA應(yīng)純化,并重懸于水中或TE緩沖液里;
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加入DNA體積不超過感受態(tài)細胞體積的1/10;
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對于純化超螺旋pUC19,100 pg~1 ng的用量時轉(zhuǎn)化效率最高,但加大DNA用量可提高總克隆數(shù);
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細胞最好在冰上解凍,
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管中的最后一點冰融化后,立即加入DNA;
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溫度高于0°C時,轉(zhuǎn)化效率就開始下降;
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加入DNA后冰育30分鐘。預計每縮短10分鐘,轉(zhuǎn)化效率會有2倍左右的損失;
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熱激的溫度和時間取決于轉(zhuǎn)化體積和離心管壁的厚度,通常為42℃孵育30~90秒;
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熱激后在37°C復蘇1小時轉(zhuǎn)化效率最佳。預計每縮短15分鐘,轉(zhuǎn)化效率會有2倍左右的損失;
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加入SOC比LB培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)化效率高約2倍;
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復蘇時振蕩試管可使轉(zhuǎn)化效率提高2倍。