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細胞凋亡發(fā)生時,染色體DNA以核小體為單位發(fā)生降解,細胞核濃縮,碎裂的核物質(zhì)被胞膜包裹游離出細胞外,成為凋亡小體。這些特征性變化可以通過顯微鏡直接觀察,或用某些熒光染料染色后,在熒光顯微鏡下觀察,或進行流式細胞分析。然而這些特征通常難以與壞死細胞進行準確區(qū)分。
凋亡早期階段,細胞膜雖然能夠維持結(jié)構的完整,但喪失了其磷脂分子分布的非對稱性,導致細胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine, PS)翻轉(zhuǎn)到細胞膜外側(cè),使凋亡細胞易被吞噬細胞識別。通過對膜上的磷脂酰絲氨酸進行染色即可區(qū)分正常細胞與凋亡細胞,再進一步對核進行染色,由于有完整結(jié)構的膜屏障,凋亡細胞的核無法被染色,而壞死細胞可以被染色,這樣就準確地區(qū)分了凋亡細胞和壞死細胞。細胞凋亡時,伴隨一系列蛋白酶學的改變,多種Caspase活性變化參與凋亡的啟動、執(zhí)行過程。檢測Caspase活性變化,是分析凋亡發(fā)生機制和特征的另一方法。某些情況下,凋亡細胞不具有全部的凋亡特征,例如特征性的DNA片段化不明顯,而出現(xiàn)DNA隨機降解;有時Caspase活性的改變與凋亡不相關,即凋亡時Caspase活性不變,而Caspase活性變化但無凋亡發(fā)生??偟膩碚f,觀察凋亡時,應該觀察反映凋亡不同特征的幾個指標,綜合分析。
GenStar公司提供四種適合于熒光顯微鏡和流式細胞分析的凋亡檢測試劑盒,分別針對細胞凋亡的不同特征性指標,操作簡單快速,穩(wěn)定可靠。StarGlow Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit(Cat. No. C203-01,02)和StarGlow Annexin V-EGFPApoptosis Detection Kit(Cat. No. C201-01)檢測暴露在胞膜外的PS和凋亡細胞特征性核形態(tài)改變,靈敏度高、特異性強。StarGlow Fluorescent Staining Apoptosis Detection Kit(Cat. No. C202-01)通過對染色體DNA直接染色區(qū)分不同的細胞狀態(tài),操作簡便快速、價格低廉,但特異性稍差。StarGlow One-step TUNEL Kit(Cat.No. C204-01)針對凋亡細胞特征性DNA片段化現(xiàn)象,靈敏度高、特異性好、適用范圍廣。建議將2~3種上述試劑盒結(jié)合使用,同時檢測同一樣品的不同指標,便于對凋亡進行客觀評價。