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DNA純度的判斷根據(jù)OD260/OD280的比值判斷
DNA純度的判斷根據(jù)OD260/OD280的比值判斷，符合要求純度高的純化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之間，低于此范圍表明蛋白質(zhì)含量超標(biāo)，高于此范圍表明樣品中含有RNA。
一般機器給出的比值是分子分母同時減OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范圍內(nèi),說明你的OD320偏高,即可能有有機物污染,比如酒精未充分揮發(fā)
我要糾正一下，純DNA的A260/A280應(yīng)大于1.8，純的RNA應(yīng)達到2.0，樣品中如果含有蛋白質(zhì)及苯酚，A260/A280比值會明顯下降。對于純的樣品，只要讀出260nm的A值即可以算出含量。通常以A值為1相當(dāng)于50微克/ml雙螺旋DNA，或者40微克/ml單鏈DNA（RNA），或者20微克/ml寡核苷酸計算。
OD260／OD280 1.9-2.0 RNA居多 純度已經(jīng)很高了
純DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白質(zhì)、酚等污染）
純RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7時表明有蛋白質(zhì)或酚污染；＞2.0時表明可能有異硫氰酸殘存）
OD是optical density（光密度）的縮寫， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。 吸光度 吸光度,absorbance,是指光線通過溶液或某一物質(zhì)前的入射光強度 與該光線通過溶液或物質(zhì)后的透射光強度比值的對數(shù)，影響它的因素有溶劑、濃度、溫度等等 吸光系數(shù)與入射光的波長以及被光通過的物質(zhì)有關(guān)。只要光的波長被固定下來，同一種物質(zhì)，吸光系數(shù)就不變。 當(dāng)一束光通過一個吸光物質(zhì)（通常為溶液）時，溶質(zhì)吸收了光能，光的強度減弱。吸光度就是用來衡量光被吸收程度的一個物理量。
吸光度用A表示， A＝abc，其中a為吸光系數(shù)，單位L/(gcm),b為液層厚度（通常為比色皿的厚度），單位cm ，c為溶液濃度，單位g/L 影響吸光度的因數(shù)是b和c。a是與溶質(zhì)有關(guān)的一個常量，溫度通過影響c，而影響A。
一般來說OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白質(zhì)的吸光度,OD230代表其他雜質(zhì)(多糖等)的吸光度。 A260/A280與OD260/OD280的意思是一樣的。A代表吸光值，而OD是光密度值，一個意思。
A260/280比值一度成為判斷核酸純度的唯一通用標(biāo)準(zhǔn)，純的DNA一般在1.8-2.0之間；后來發(fā)現(xiàn)在抽提過程中使用的許多試劑影響 A260 和 A280 讀數(shù)；同時，對同一樣品 10 倍數(shù)量級稀釋后測定吸光值發(fā)現(xiàn)，分光光度計的吸光值僅在一定的區(qū)域是線性的。結(jié)論是：當(dāng) A260 讀數(shù)處在 0.1-0.5 之間，A200 到 A320 之間的數(shù)值構(gòu)成一條光滑的曲線時，
少量苯酚 (30 ul/ml) 殘留使 A230，A260，A280 均變大 (差不多增加一倍)，但 A260/A280 和 A260/A230 均在 2 左右。少量異硫氰酸胍 (132 uM) 殘留使 A230 變大，但 A260，A280 幾乎不變，所以 A260/A280 仍在 2 左右，而 A260/A230 大大低于 2。大量異硫氰酸胍 (2.4 M) 殘留使 A230，A260，A280 均變大，根本就沒有辦法測定了。PEG (6.25%) 殘留使 A230，A260，A280 均變大，但對 A230，A260 影響更大，所以 A260/A280 比 2 大不少，而 A260/A230 仍在 2 左右。
核酸抽提中常用的試劑，如 Phenol，Guanidine Isothiocyanate，PEG 都能使 A260 和A280 的值變大，但是卻可能使二者的比值與高純度核酸的比值一致。因為 A260 值幾乎是峰值，所以有必要在其兩邊各取一個：A280 和 A230。干凈的核酸 A260/A230 應(yīng)該在 2 左右。如果有在230nm處的強吸收提示污染有酚鹽離子等有機化合物
1.蛋白質(zhì)污染：確保不要吸入中間層及有機相。減少起始樣品量，確保裂解完全、徹底。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，則用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。
2.苯酚殘留：確保不要吸入中間層及有機相。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。
3.多糖或多酚的殘留：一些特殊的組織和植物中，多糖、多酚含量較多，這些殘留也會導(dǎo)致OD260/OD280比值偏低。因此，從這類材料中提取RNA時，需要注意多糖、多酚雜質(zhì)的去除。
4.設(shè)備限制：測定OD260及OD280數(shù)值時，要使OD260讀數(shù)在0.1-0.5之間。此范圍線性最好。用水稀釋樣品：測OD值時，對照及樣品稀釋液請使用10mM Tris，pH7.5。用水作為稀釋液將導(dǎo)致比值偏低。
比值低可能有蛋白污染，高了可能有DNA污染，建議你抽提的RNA分三管，兩管保存，另一管用來跑膠和測定OD，跑膠是最直觀的，1%的膠就可以，抽提后馬上跑，一般不會降解很多，所以設(shè)備材料不需要去酶處理
不會有影響的。你的od比低可能是溶解時用的水的PH值偏酸?？梢栽囍{(diào)到8.0左右再測，這樣就會上來了。
一般機器給出的比值是分子分母同時減OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范圍內(nèi),說明你的OD320偏高,即可能有有機物污染,比如酒精未充分揮發(fā)
我要糾正一下，純DNA的A260/A280應(yīng)大于1.8，純的RNA應(yīng)達到2.0，樣品中如果含有蛋白質(zhì)及苯酚，A260/A280比值會明顯下降。對于純的樣品，只要讀出260nm的A值即可以算出含量。通常以A值為1相當(dāng)于50微克/ml雙螺旋DNA，或者40微克/ml單鏈DNA（RNA），或者20微克/ml寡核苷酸計算。
OD260／OD280 1.9-2.0 RNA居多 純度已經(jīng)很高了
純DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白質(zhì)、酚等污染）
純RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7時表明有蛋白質(zhì)或酚污染；＞2.0時表明可能有異硫氰酸殘存）
OD是optical density（光密度）的縮寫， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。 吸光度 吸光度,absorbance,是指光線通過溶液或某一物質(zhì)前的入射光強度 與該光線通過溶液或物質(zhì)后的透射光強度比值的對數(shù)，影響它的因素有溶劑、濃度、溫度等等 吸光系數(shù)與入射光的波長以及被光通過的物質(zhì)有關(guān)。只要光的波長被固定下來，同一種物質(zhì)，吸光系數(shù)就不變。 當(dāng)一束光通過一個吸光物質(zhì)（通常為溶液）時，溶質(zhì)吸收了光能，光的強度減弱。吸光度就是用來衡量光被吸收程度的一個物理量。
吸光度用A表示， A＝abc，其中a為吸光系數(shù)，單位L/(gcm),b為液層厚度（通常為比色皿的厚度），單位cm ，c為溶液濃度，單位g/L 影響吸光度的因數(shù)是b和c。a是與溶質(zhì)有關(guān)的一個常量，溫度通過影響c，而影響A。
一般來說OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白質(zhì)的吸光度,OD230代表其他雜質(zhì)(多糖等)的吸光度。 A260/A280與OD260/OD280的意思是一樣的。A代表吸光值，而OD是光密度值，一個意思。
A260/280比值一度成為判斷核酸純度的唯一通用標(biāo)準(zhǔn)，純的DNA一般在1.8-2.0之間；后來發(fā)現(xiàn)在抽提過程中使用的許多試劑影響 A260 和 A280 讀數(shù)；同時，對同一樣品 10 倍數(shù)量級稀釋后測定吸光值發(fā)現(xiàn)，分光光度計的吸光值僅在一定的區(qū)域是線性的。結(jié)論是：當(dāng) A260 讀數(shù)處在 0.1-0.5 之間，A200 到 A320 之間的數(shù)值構(gòu)成一條光滑的曲線時，
少量苯酚 (30 ul/ml) 殘留使 A230，A260，A280 均變大 (差不多增加一倍)，但 A260/A280 和 A260/A230 均在 2 左右。少量異硫氰酸胍 (132 uM) 殘留使 A230 變大，但 A260，A280 幾乎不變，所以 A260/A280 仍在 2 左右，而 A260/A230 大大低于 2。大量異硫氰酸胍 (2.4 M) 殘留使 A230，A260，A280 均變大，根本就沒有辦法測定了。PEG (6.25%) 殘留使 A230，A260，A280 均變大，但對 A230，A260 影響更大，所以 A260/A280 比 2 大不少，而 A260/A230 仍在 2 左右。
核酸抽提中常用的試劑，如 Phenol，Guanidine Isothiocyanate，PEG 都能使 A260 和A280 的值變大，但是卻可能使二者的比值與高純度核酸的比值一致。因為 A260 值幾乎是峰值，所以有必要在其兩邊各取一個：A280 和 A230。干凈的核酸 A260/A230 應(yīng)該在 2 左右。如果有在230nm處的強吸收提示污染有酚鹽離子等有機化合物
1.蛋白質(zhì)污染：確保不要吸入中間層及有機相。減少起始樣品量，確保裂解完全、徹底。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，則用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。
2.苯酚殘留：確保不要吸入中間層及有機相。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。
3.多糖或多酚的殘留：一些特殊的組織和植物中，多糖、多酚含量較多，這些殘留也會導(dǎo)致OD260/OD280比值偏低。因此，從這類材料中提取RNA時，需要注意多糖、多酚雜質(zhì)的去除。
4.設(shè)備限制：測定OD260及OD280數(shù)值時，要使OD260讀數(shù)在0.1-0.5之間。此范圍線性最好。用水稀釋樣品：測OD值時，對照及樣品稀釋液請使用10mM Tris，pH7.5。用水作為稀釋液將導(dǎo)致比值偏低。
比值低可能有蛋白污染，高了可能有DNA污染，建議你抽提的RNA分三管，兩管保存，另一管用來跑膠和測定OD，跑膠是最直觀的，1%的膠就可以，抽提后馬上跑，一般不會降解很多，所以設(shè)備材料不需要去酶處理
不會有影響的。你的od比低可能是溶解時用的水的PH值偏酸?？梢栽囍{(diào)到8.0左右再測，這樣就會上來了。