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    質(zhì)粒DNA的提取與純化質(zhì)粒是一類雙鏈、閉環(huán)的DNA，大小范圍從1 kb至200 kb以上不等。通常情況下，質(zhì)粒可持續(xù)穩(wěn)定地處于染色體外的游離狀態(tài)，具有自主復制功能；但在一定條件下也會可逆地整合到宿主染色體上，隨著染色體的復制而復制，并通過細胞分裂傳遞到后代。質(zhì)粒已成為核酸克隆和測序最常用的載體。質(zhì)粒DNA提取的產(chǎn)量和純度直接關(guān)系到下游實驗操作的成敗。提取質(zhì)粒DNA的方法很多，目前應用最為廣泛的是堿裂解－中和法，其基本原理為：當菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性；當加入中和液后，質(zhì)粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態(tài)，離心時保留在上清液中；蛋白質(zhì)與染色體DNA不能復性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。質(zhì)粒DNA的純化方法通常是利用了質(zhì)粒DNA相對較小以及共價閉環(huán)這兩個性質(zhì)，例如氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心、離子交換層析、凝膠過濾層析、聚乙二醇分級沉淀等方法。但這些方法相對昂貴或費時。對于小量制備的質(zhì)粒DNA，經(jīng)過苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等簡單步驟即可去除殘余蛋白質(zhì)和RNA，所得純化的質(zhì)粒DNA可滿足酶切、轉(zhuǎn)化、探針標記、測序等要求。然而該方法耗時較長，需要接觸苯酚、氯仿等有毒溶劑，而且所提取的質(zhì)粒 DNA有時不能被限制性內(nèi)切酶完全消化，因此在追求效率的今天，這種方法已逐漸被質(zhì)量可靠、快捷便利的離心吸附柱純化方法所代替。GenStar公司提供的StarPrep質(zhì)粒快速小量提取試劑盒和StarPure超純質(zhì)?？焖傩×刻崛≡噭┖胁捎秒x心吸附柱純化法，適用于提取20 kb以下的質(zhì)粒DNA，具有提取產(chǎn)量高、純度好、快速簡便、效果穩(wěn)定等優(yōu)點。StarPure超純質(zhì)粒大量提取試劑盒采用了溶液沉淀法純化，可去除細菌內(nèi)毒素，對質(zhì)粒的損傷小，質(zhì)粒丟失少，對大型質(zhì)粒也可以有效提取。線性DNA片段的純化PCR產(chǎn)物或酶促反應的DNA片段中所含的酶、鹽類、殘留引物、dNTP和其他DNA片段有可能影響后續(xù)反應的效果，故需經(jīng)過純化處理。 對于電泳檢測觀察到的單一條帶，可以采用乙醇沉淀回收或單純過柱回收方法；對于有非特異性條帶或其他雜帶的DNA片段，則有必要進行膠回收純化。目前商品化的DNA片段回收試劑盒多采用硅膠基質(zhì)材料特異性地吸附DNA，通過高鹽/乙醇洗脫，清除雜質(zhì)。由于各種試劑盒所采用的硅膠基質(zhì)材料不同，DNA片段的回收效率也存在著很大的差異。GenStar公司提供的StarPrep快速膠回收試劑盒和StarPrep PCR/DNA片段純化試劑盒采用高吸附性能的硅膠膜，配以優(yōu)化的膜結(jié)合緩沖液和膜漂洗液，操作步驟簡單快速，回收效率高、效果穩(wěn)定?；蚪MDNA的提取、純化基因組DNA相對穩(wěn)定，故其提取方法也相對簡單。通常細胞通過表面活性劑處理，釋放出基因組DNA，經(jīng)過蛋白酶和RNA酶消化后，經(jīng)有機溶劑抽提和乙醇沉淀或過柱純化即可獲得一定量的基因組DNA。目前商品化的基因組DNA提取試劑盒分為溶液型和離心吸附柱型兩種。溶液型產(chǎn)品價格經(jīng)濟，產(chǎn)率高，可獲取適用于建立文庫的高分子量DNA，并且可盡可能地回收稀有樣品中的DNA；但操作過程較為繁瑣，對操作者的實驗技能要求較高。離心吸附柱型產(chǎn)品使用方便、快速，提取的DNA 純度較高，但價格昂貴，產(chǎn)量偏低，并且得到的片段多在20 kb左右，不適合建立DNA文庫或用作長片段PCR產(chǎn)物的模板。高純度、完整的核酸是獲得后續(xù)實驗成功的關(guān)鍵因素，而高產(chǎn)率對稀有樣品而言具有非常重要的意義。GenStar公司經(jīng)過精心挑選優(yōu)質(zhì)原料，并優(yōu)化試劑配方和實驗流程，開發(fā)了一系列用于不同樣品的溶液型基因組DNA提取、純化產(chǎn)品。DNAzol適用于從動物細胞或組織、細菌、昆蟲、真菌等樣品。DNAzol WB系在DNAzol的基礎(chǔ)上增加了紅細胞裂解液，專門用于從全血中提取基因組DNA。針對植物組織細胞壁較厚，基因組DNA提取存在一定難度的問題，GenStar公司特別推出了一系列植物基因組DNA提取試劑盒。普通型產(chǎn)品（Cat. No. D101）可以高效地提取絕大多數(shù)科研用植物樣品的基因組DNA，較傳統(tǒng)方法獲取的DNA純度更高，適用于各種后續(xù)分子生物學實驗操作；快速（Rapid）植物基因組DNA提取試劑盒適宜擬南芥等幼嫩植物樣品，可在20~30分鐘內(nèi)獲取質(zhì)量可靠的基因組DNA作為PCR模板；超速（Magic）植物基因組DNA提取試劑盒可在10分鐘內(nèi)從擬南芥的葉片或花中獲得PCR模板，尤適于高通量篩選。