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TEM樣品包埋塊制作有關(guān)注意事項
一、取材與運輸：
1、動作迅速：組織離體后，應(yīng)將其快速放入固定液中，使組織細胞 盡可能保持原來的生活狀態(tài)，在空氣中暴露的時間越長，對結(jié)果的 影響就越大。細胞懸浮液離心，棄上清，PBS清洗2次，加入固定液4度 固定。注意取材的原則：盡量快（停止血供1min內(nèi)放入固定液中）
、組織塊小（1mm厚度）、4度條件下取材、固定液體積理論上為樣 本體積的20倍以上。4度固定一天后，寄送。
2、減少損傷：選擇鋒利切割器械，減少牽拉或擠壓組織；
3、組織大小與細胞量：組織盡量切成1mm3大小，如果無相關(guān)工具 ，我公司可代為切小。但請將目標區(qū)域切得盡量小，防止我們修樣 時，選取的區(qū)域與您觀察的不一致。如果檢測標本為細胞，一般細胞量達到10的7次方，呈肉眼可見的團狀。若細胞太少，對結(jié)果可能 會產(chǎn)生影響。
4、運輸事項：將組織或者細胞完全浸泡在2.5%戌二醛中4度運輸，
要保證完全浸泡，樣品容器中的空氣越少越好。
透射電鏡樣品制作扭作流程
1) 取材
2) 漂洗（生理鹽水）
3) 前固定（2.5%戌二醛，4°C冰箱2小時以上）?
1) 漂洗（0.1M嶙酸緩沖液，3次，45分鐘）
2) 后固定（1%鋨酸1小時左右）
3) 漂洗（0.1M磷酸緩沖液， 3次，45分鐘）
4) 塊染（1%醋酸鈾2小時）
5) 梯度脫水（50%、 70%、 80%、 90%、 100% 丙酮各 15分鐘，100% 2次，各10分鐘）
6) 浸透（丙酮：包埋液=1 : 1， 37°C烘箱2
小時；丙酮：包埋液=1 : 4， 37C烘箱過夜；純包埋液 45C烘箱2小時）
7) 包埋聚合（45 C烘箱3小時，65 C烘箱48小時）
8) 修塊
9) 半薄切片光鏡定位
10) 挑選并清洗好載網(wǎng)，在載網(wǎng)上覆蓋支持膜
11) 超薄切片
戌二醛固定液的配置
(a)磷酸緩沖液的配方：
A液：0.2M磷酸氫二鈉貯備液：
Na2HPO4-2H2O 或：Na2HP04.7H20 或：Na2HP04.12H20?
加雙蒸水至 500毫升
B液：0.2M磷酸二氫鈉貯備液
NaH2PO4 ? H2O 13.8 克
或：NaH2P04 ? 2H20 15.61 克
加雙蒸水至 500毫升
使用時將A液40.5ml和B液9.5ml混合成0.2嶙酸緩沖液。（PH7.4)
(b) 2.5%戌二醛固定液的配方：
0.2M磷酸緩沖液 50毫升
25%戌二醛溶液（電鏡專用） 10毫升
加雙蒸水至 100毫升
戌二醛溶液最終濃度：pH值7.3-7.4
1、動作迅速：組織離體后，應(yīng)將其快速放入固定液中，使組織細胞 盡可能保持原來的生活狀態(tài)，在空氣中暴露的時間越長，對結(jié)果的 影響就越大。細胞懸浮液離心，棄上清，PBS清洗2次，加入固定液4度 固定。注意取材的原則：盡量快（停止血供1min內(nèi)放入固定液中）
、組織塊小（1mm厚度）、4度條件下取材、固定液體積理論上為樣 本體積的20倍以上。4度固定一天后，寄送。
2、減少損傷：選擇鋒利切割器械，減少牽拉或擠壓組織；
3、組織大小與細胞量：組織盡量切成1mm3大小，如果無相關(guān)工具 ，我公司可代為切小。但請將目標區(qū)域切得盡量小，防止我們修樣 時，選取的區(qū)域與您觀察的不一致。如果檢測標本為細胞，一般細胞量達到10的7次方，呈肉眼可見的團狀。若細胞太少，對結(jié)果可能 會產(chǎn)生影響。
4、運輸事項：將組織或者細胞完全浸泡在2.5%戌二醛中4度運輸，
要保證完全浸泡，樣品容器中的空氣越少越好。
透射電鏡樣品制作扭作流程
1) 取材
2) 漂洗（生理鹽水）
3) 前固定（2.5%戌二醛，4°C冰箱2小時以上）?
1) 漂洗（0.1M嶙酸緩沖液，3次，45分鐘）
2) 后固定（1%鋨酸1小時左右）
3) 漂洗（0.1M磷酸緩沖液， 3次，45分鐘）
4) 塊染（1%醋酸鈾2小時）
5) 梯度脫水（50%、 70%、 80%、 90%、 100% 丙酮各 15分鐘，100% 2次，各10分鐘）
6) 浸透（丙酮：包埋液=1 : 1， 37°C烘箱2
小時；丙酮：包埋液=1 : 4， 37C烘箱過夜；純包埋液 45C烘箱2小時）
7) 包埋聚合（45 C烘箱3小時，65 C烘箱48小時）
8) 修塊
9) 半薄切片光鏡定位
10) 挑選并清洗好載網(wǎng)，在載網(wǎng)上覆蓋支持膜
11) 超薄切片
戌二醛固定液的配置
(a)磷酸緩沖液的配方：
A液：0.2M磷酸氫二鈉貯備液：
Na2HPO4-2H2O 或：Na2HP04.7H20 或：Na2HP04.12H20?
加雙蒸水至 500毫升
B液：0.2M磷酸二氫鈉貯備液
NaH2PO4 ? H2O 13.8 克
或：NaH2P04 ? 2H20 15.61 克
加雙蒸水至 500毫升
使用時將A液40.5ml和B液9.5ml混合成0.2嶙酸緩沖液。（PH7.4)
(b) 2.5%戌二醛固定液的配方：
0.2M磷酸緩沖液 50毫升
25%戌二醛溶液（電鏡專用） 10毫升
加雙蒸水至 100毫升
戌二醛溶液最終濃度：pH值7.3-7.4