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Ar Qual Electr： 10×50μl
pCAMBIA2301（control vector) 10ng/μl 10μl
保存條件： -80℃
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri (agropine type)
產(chǎn)品說(shuō)明
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染
大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar Qual發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有
廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，番茄，柑橘等），同時(shí)具有鏈霉素，氯霉素抗性。唯地生物開(kāi)發(fā)的Ar Qual發(fā)
根農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105
cfu/μg DNA；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒（size:40 kd）檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103 cfu/μg DNA。
常規(guī)操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分
揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分
降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5 μg質(zhì)粒DNA（質(zhì)粒體積不大于6ul，最好用
試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫?/span>
擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電
轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動(dòng)電擊，電
擊完成快速插入冰中，加入1 ml無(wú)抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上，倒置放于
28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：
|
抗生素 |
配方 |
原液 |
工作液 |
|
羧芐青霉素 (carb) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
硫酸卡那霉素 (kan) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
鏈霉素 (strep) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 |
10 mg/ml |
50 μg/ml |
|
利福平 (rif) |
DMSO溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 |
10 mg/ml |
20 μg/ml |
|
慶大霉素 (gent) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 |
20 mg/ml |
40 μg/ml |
|
氯霉素（cam） |
無(wú)水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 |
34 mg/ml |
34 ug/ml |
常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
|
農(nóng)桿菌菌株 |
羧芐青霉素(carb) |
鏈霉素(strep) |
利福平(rif) |
氯霉素(gent) |
硫酸卡那霉素(kan) |
|
Ar A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
|
MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
補(bǔ)水到1L體積，完全溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌
配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌
每1L 滅菌的TY液體營(yíng)養(yǎng)液中加入10ml 無(wú)菌的1M氯化鈣水溶液即可。
若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或最終用于涂板的菌量。
4. Ar Qual具有鏈霉素、氯霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。