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Ar Qual： 100μl×10
pCAMBIA2301（control vector 10ng/μl ) 10μl
保存條件： -80℃
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri (agropine type)
產(chǎn)品說明
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大
多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar Qual發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有
廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，番茄，柑橘等），同時具有鏈霉素，氯霉素抗性。本公司生產(chǎn)的Ar Qual化學(xué)
轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
常規(guī)操作方法
1.取-80℃保存的Ar qual發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2. 每100 μl感受態(tài)加1μg（體積不大于10μl）質(zhì)粒DNA，用手快速、劇烈撥打管底混勻或用槍吹吸混勻，依
次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時。
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上，
倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天
● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：
|
抗生素 |
配方 |
原液 |
工作液 |
|
羧芐青霉素 (carb) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
硫酸卡那霉素(kan) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 |
50 mg/ml |
50 μg/ml |
|
鏈霉素 (strep) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 |
10 mg/ml |
50 μg/ml |
|
利福平 (rif) |
DMSO溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 |
10 mg/ml |
20 μg/ml |
|
慶大霉素 (gent) |
雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 |
20 mg/ml |
40 μg/ml |
|
氯霉素（cam） |
無水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌 |
34 mg/ml |
34 ug/ml |
常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
|
農(nóng)桿菌菌株 |
羧芐青霉素(carb) |
鏈霉素(strep) |
利福平(rif) |
氯霉素(gent) |
硫酸卡那霉素(kan) |
|
Ar A4 |
S |
S |
S |
S |
R |
|
MSU440 |
S |
R |
S |
S |
S |
|
Ar Qual |
S |
R |
S |
R |
S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
補水到1L體積，完全溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌
配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌
每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。
若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。
注意事項
1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)
化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
2. 混勻質(zhì)粒時應(yīng)用手指快速撥打管底或用槍吹吸混勻，務(wù)必使質(zhì)?？焖佟⒕鶆蚍稚㈤_，
與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲
得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。
4. Ar Qual具有鏈霉素、氯霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。