產(chǎn)品分類
- ZYMO
- ZYMO
- brand
- 普蘭德
- 美國Beckman Coulter公司
- Allegra X-15R臺式冷凍離心機(jī)
- Allegra 64R高速冷凍臺式離心機(jī)
- Allegra X-30/30R臺式高速離心機(jī)
- Allegra 25R臺式高速冷凍離心機(jī)
- Microfuge12/12R臺式離心機(jī)
- Microfuge 20/20R
- Microfuge 16高速臺式離心機(jī)
- Avanti J-E多用途高效離心機(jī)
- Avanti J-30I高效離心機(jī)
- Avanti J-HC大容量離心機(jī)
- 新一代Avanti JXN-26智能型高效離心機(jī)
- 新一代Avanti JXN-30智能型高效離心機(jī)
- Avanti J-26XP系列高效離心機(jī)
- J6-MI大容量冷凍離心機(jī)
- Optima?XPN超速離心機(jī)
- Optima? XE超速離心機(jī)
- Optima MAX-TL臺式超速離心機(jī)
- Optima? MAX-XP超速離心機(jī)
- Vi-CELL XR細(xì)胞存活率分析儀
- Qiyunbio
- 北京百泰克
- 德國Miccra 公司
- 德國Memmert公司
- 海樂楓公司純水與超純水系統(tǒng)
- 唯地感受態(tài)細(xì)胞
- 測序服務(wù)
- 杭州米歐儀器
- 美國BD公司流式細(xì)胞儀
- 美國Zealway公司高溫高壓滅菌鍋
- 弗德
- 英國Ruskinn公司厭氧、微需氧工作站
- Bugbox 厭氧工作站
- Concept 1000厭氧工作站
- Concept Plus 厭氧工作站
- Concept 400厭氧工作站
- BugBox Plus厭氧工作站
- Concept 400M微需要養(yǎng)工作站
- Bugbox M 微需要養(yǎng)工作站
- Sci-tive Dual 不對稱 活細(xì)胞工作站
- Sci-tive Dual對稱 活細(xì)胞工作站
- Sci-tive NN活細(xì)胞工作站
- Sci-tive N 活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 1000活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 Plus活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 500活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 400活細(xì)胞工作站
- Bio-Rad伯樂
- Genstar 產(chǎn)品
- Union 永聯(lián)
- 新加坡ESCO公司生物安全柜、CO2培養(yǎng)箱
- 實(shí)驗(yàn)儀器
- 實(shí)驗(yàn)耗材
- 瑞士Infors公司
- Celltron磁力驅(qū)動
- Thermotron振蕩培養(yǎng)箱
- Minitron-Bacteria振蕩培養(yǎng)箱
- Multitron-Bacteria恒溫振蕩培養(yǎng)箱
- Minitron Cell振蕩培養(yǎng)箱
- Multitron Cell全功能細(xì)胞培養(yǎng)箱
- RC落地?fù)u床
- Multitherm搖床
- Multitron Standard系列搖床
- Ecotron搖床
- Orbitron 搖床
- Labfors 5 Cell細(xì)胞生物反應(yīng)器
- Techfors Cell大型生物反應(yīng)器
- Techfors-S Cell中試原位滅菌生物反應(yīng)器
- Multifors Cell平行生物反應(yīng)器
- Labfors Lux Cell光照發(fā)酵罐
- Minifors Cell細(xì)胞發(fā)酵罐
- Minifors Bacteria實(shí)驗(yàn)臺式發(fā)酵罐
- Labfors 5 Bacteria 實(shí)驗(yàn)發(fā)酵罐
- Labfors Lux光照發(fā)酵罐
- Multifors Bacteria 平行發(fā)酵罐
- Techfors-S Bacteria中試型發(fā)酵罐
- Terrafors Bacteria固態(tài)樣品發(fā)酵罐
- Techfors大型發(fā)酵系統(tǒng)
- X-Controlle發(fā)酵體系控制系統(tǒng)
- CELLine膜培養(yǎng)瓶
- 實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
- 武漢優(yōu)爾生 cloud-clone ELISA kit
- CST
- Omega
- Abcam
- 常用試劑
- Abmart 抗體
- 阿拉丁
- Fermentas
- Invitrogen
新聞中心
聯(lián)系我們
- 地 址：深圳市南山區(qū)西麗街道九祥嶺工業(yè)區(qū)
- 電 話：13006636686，13751058447，0755-33160345
- 傳 真：0755-33160345
- 郵 箱：3344179313@qq.com
Y1HGold: 10×100μl 保存條件：-80℃
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存條件：-80℃
Carrier DNA (5 μg/μl) 100μl 保存條件：-20℃
PEG/LiAC: 5ml 保存條件： 4℃
MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
產(chǎn)品說明
Y1HGold菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4-AbA酵母單雜系統(tǒng)用菌株，MATα型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行篩庫試驗(yàn)。Transformation marker為：ura3，leu2；報(bào)告基因?yàn)椋?/span>AbAr。Y1HGold-GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：pAbAi 和PGADT7。質(zhì)粒pAbAi的篩選標(biāo)志為URA，用于表達(dá) pBait-AbAi construct (1~3個(gè)bait DNA序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到pAbAi中)；質(zhì)粒pGADT7的篩選標(biāo)志為LEU，用于表達(dá)AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4-AbA酵母單雜系統(tǒng)原理：Aureobasidin A (AbA)是一種環(huán)酯肽抗生素，在低濃度 (0.1-0.2 μg/ml)下即可對酵母產(chǎn)生毒性?；蚪M中整合了pBait-AbAi 的酵母菌株 (Bait-Reporter Yeast Strains)，當(dāng)獵物蛋白 (Prey)結(jié)合到誘餌序列 (Bait DNA)上，GAL4 AD就會激活A(yù)bAr的表達(dá)，從而能夠在含有抗生素AbA 的培養(yǎng)基上生長。AbAr與營養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn)，可以降低酵母單雜假陽性發(fā)生的概率。Y1HGold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個(gè)月，pGADT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
1. 取pBait-AbAi質(zhì)粒5μg，BstBI或 BbsI酶切1小時(shí)，回收。
2. 取100 μl冰上融化的Y1HGold感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的線性pBait-AbAi質(zhì)粒1-5 μg（體積不高于15 μl），Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴，重復(fù)一次) 10 μl，PEG/LiAc 500 μl并吸打幾次混勻，30度水浴30 min (15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
4. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH2O 400 μl 重懸，離心 30s棄上清。
4. ddH2O 50 μl重懸，涂SD/-Ura平板，29℃培養(yǎng)72 h。
5. 挑取5-10個(gè)克隆，用PCR方法確定pBait-AbAi 整合到Y1HGold 基因組中，PCR 陽性菌株在SD/-Ura平板劃線，29℃培養(yǎng)72 h，4℃保存，此菌株即是Y1HGold[Bait/AbAi] 菌株。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3. 同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。
4. Y1HGold酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。
5. 菌落變粉不是污染，是酵母細(xì)胞生長中一個(gè)常見現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的Adenine被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine合成途徑受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。
6. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆。