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一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性 本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。 注意事項 1． 第一次使用前請先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇，充分混勻，加入后請及 時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入! 2． Buffer FP1、Buffer P3 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫 助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 3． 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋 緊蓋子。 二、原理簡介 針對多糖、多酚的去除成份，迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，不需 要氯仿抽提，徹底清除多糖、多酚和蛋白質(zhì)，基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下 選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心步驟, 進(jìn) 試劑盒組成 保存 50 次 （DP10011） 100 次 （DP10012） 200 次 （DP10013） Buffer FP1 室溫 30 ml 60 ml 120 ml Buffer P2 室溫 7 ml 14 ml 28 ml Buffer P3 室溫 50 ml 100 ml 200 ml RNase A -20℃ 200 μl 400 μl 800 μl 漂洗液 WB 室溫 15 ml 25ml 25mlX2 第一次使用前按說明加指定量乙醇 洗脫緩沖液 EB 室溫 15 ml 20 ml 40 ml 分離柱 A 室溫 50 個 100 個 200 個 吸附柱 AC 室溫 50 個 100 個 200 個 收集管（2ml） 室溫 50 個 100 個 200 個  一步將多糖，多酚和細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液 將基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。 三、試劑盒特點(diǎn) 1． 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附 量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。 2． 不需要使用有毒的苯酚，氯仿等試劑。 3． 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在 1 小時內(nèi)完成。 4． 數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280 典型 的比值達(dá) 1.7～1.9，長度可達(dá) 30Kb-50kb，可直接用于 PCR， Southern-blot 和各種酶切反應(yīng)。 四、注意事項（實(shí)驗前必須首先閱讀這部分?。? 1． 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13，000 rpm的 傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。 2． 開始實(shí)驗前將需要水浴的物品先預(yù)熱到 65℃?zhèn)溆谩? 3． Buffer P3 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染 皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理 鹽水沖洗。 4． 不同來源的植物組織材料中提取的DNA 的量會有差異，一般100mg 新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。 5． 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA, 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。 也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保 PH 大于 7.5, PH 過低影響洗脫效 率。用水洗脫 DNA 應(yīng)該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可 以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，PH 8.0），但 是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。 五、操作步驟 * 第一次使用前請先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇! * 將 Buffer P1 放置在 65℃預(yù)熱,使用前加入β-巰基乙醇到終濃度 0.2%。 1． 加熱 Buffer FP1 到 65℃預(yù)熱滅菌去離子水。 2． 取適量樣本在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。 3． 轉(zhuǎn)移細(xì)粉（植物新鮮組織 100 mg 或干重組織 30 mg）到一個 1.5ml 離心管，不要解凍，加入 550μl 65℃預(yù)熱 Buffer FP1 和 4μlRNase A 劇烈渦旋振蕩混勻 1 分鐘，65℃水浴 30 分鐘.期間激烈渦旋震蕩 3 次。 4． 加入 130μl 的 Buffer P2,充分混勻，12000rpm 離心 3 分鐘。 5． 小心吸取上清到一個分離柱 A，注意不要吸到界面物質(zhì)，12,000 rpm 離心 1 分鐘，收集下液。 6． 加入 1.5 倍體積的 Buffer P3 立刻輕柔渦旋，充分混勻。 7． 將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個吸附柱 AC 中， （吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的 廢液。 8． 加入 700μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄掉廢液。 9． 加入 500μl 漂洗液 WB，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄掉廢液。 10．將吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 離心 3-5 分鐘，盡量除 去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。 11．取出吸附柱 AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 50μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱）， 室 溫放置 3-5 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘收集 DNA。 洗脫體積越大，洗脫效率越高，可以 50μl 分兩次洗脫，可以提高洗脫效率。 12．DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長時間存放，可以放置在-20℃。 六、疑難解答（Trouble shooting） 出現(xiàn)的問題 可能的原因 建議解決方法 DNA產(chǎn)量低 處理材料過量或者裂解不 完全 使用適量的起始材料，充分研磨 或者勻漿 RNA 殘留 植物含量 RNA 太豐富 在 步 驟 3 后 裂 解 物 中 加 40μl RNase ， 也 可 以 多 加 到 80μl RNase。 未提取到 DNA 漂洗液 WB 中忘記加無水 乙醇 第一次實(shí)驗時，在漂洗液 WB 中 加入指定量無水乙醇。 洗脫下來的 DNA 溶 液帶顏色或者膜上 有明顯的色素殘留 漂洗次數(shù)不夠 步驟 7 完成后，加 500μlWB 或 無水乙醇再漂洗一遍 起始材料太多過量 減少起始處理材料，不要過量 洗脫下來的DNA產(chǎn)量 低 離心柱殘留有較多乙醇或 者底部不慎重沾有乙醇 確保做了步驟 10，否則殘留乙醇 會影響洗脫效率。 使用了水或者其它非最佳 液體代替洗脫緩沖液 仔細(xì)閱讀步驟 10 和只使用洗脫緩 沖液 EB 洗脫。 A260吸光值異常偏高 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗 脫下來，干擾了吸光值 將洗脫的基因組 DNA 溶液 13， 000rpm 再離心一分鐘，小心取上 清使用。 DNA下游酶切不能 切開或者酶切不完 全 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗 脫下來，抑制了酶切反應(yīng) 將洗脫的基因組 DNA 溶液 13， 000rpm 再離心一分鐘，小心取上 清使用。 離心柱殘留有較多乙醇或 者底部不慎沾有乙醇抑制 了酶切反應(yīng) 確保做了步驟 10，然后空氣中晾 幾分鐘，讓殘留乙醇揮發(fā)。