產(chǎn)品分類
- ZYMO
- ZYMO
- brand
- 普蘭德
- 美國Beckman Coulter公司
- Allegra X-15R臺式冷凍離心機
- Allegra 64R高速冷凍臺式離心機
- Allegra X-30/30R臺式高速離心機
- Allegra 25R臺式高速冷凍離心機
- Microfuge12/12R臺式離心機
- Microfuge 20/20R
- Microfuge 16高速臺式離心機
- Avanti J-E多用途高效離心機
- Avanti J-30I高效離心機
- Avanti J-HC大容量離心機
- 新一代Avanti JXN-26智能型高效離心機
- 新一代Avanti JXN-30智能型高效離心機
- Avanti J-26XP系列高效離心機
- J6-MI大容量冷凍離心機
- Optima?XPN超速離心機
- Optima? XE超速離心機
- Optima MAX-TL臺式超速離心機
- Optima? MAX-XP超速離心機
- Vi-CELL XR細胞存活率分析儀
- Qiyunbio
- 北京百泰克
- 德國Miccra 公司
- 德國Memmert公司
- 海樂楓公司純水與超純水系統(tǒng)
- 唯地感受態(tài)細胞
- 測序服務(wù)
- 杭州米歐儀器
- 美國BD公司流式細胞儀
- 美國Zealway公司高溫高壓滅菌鍋
- 弗德
- 英國Ruskinn公司厭氧、微需氧工作站
- Bio-Rad伯樂
- Genstar 產(chǎn)品
- Union 永聯(lián)
- 新加坡ESCO公司生物安全柜、CO2培養(yǎng)箱
- 實驗儀器
- 實驗耗材
- 瑞士Infors公司
- Celltron磁力驅(qū)動
- Thermotron振蕩培養(yǎng)箱
- Minitron-Bacteria振蕩培養(yǎng)箱
- Multitron-Bacteria恒溫振蕩培養(yǎng)箱
- Minitron Cell振蕩培養(yǎng)箱
- Multitron Cell全功能細胞培養(yǎng)箱
- RC落地?fù)u床
- Multitherm搖床
- Multitron Standard系列搖床
- Ecotron搖床
- Orbitron 搖床
- Labfors 5 Cell細胞生物反應(yīng)器
- Techfors Cell大型生物反應(yīng)器
- Techfors-S Cell中試原位滅菌生物反應(yīng)器
- Multifors Cell平行生物反應(yīng)器
- Labfors Lux Cell光照發(fā)酵罐
- Minifors Cell細胞發(fā)酵罐
- Minifors Bacteria實驗臺式發(fā)酵罐
- Labfors 5 Bacteria 實驗發(fā)酵罐
- Labfors Lux光照發(fā)酵罐
- Multifors Bacteria 平行發(fā)酵罐
- Techfors-S Bacteria中試型發(fā)酵罐
- Terrafors Bacteria固態(tài)樣品發(fā)酵罐
- Techfors大型發(fā)酵系統(tǒng)
- X-Controlle發(fā)酵體系控制系統(tǒng)
- CELLine膜培養(yǎng)瓶
- 實驗技術(shù)服務(wù)
- 武漢優(yōu)爾生 cloud-clone ELISA kit
- CST
- Omega
- Abcam
- 常用試劑
- Abmart 抗體
- 阿拉丁
- Fermentas
- Invitrogen
新聞中心
聯(lián)系我們
- 地 址：深圳市南山區(qū)西麗街道九祥嶺工業(yè)區(qū)
- 電 話：13006636686，13751058447，0755-33160345
- 傳 真：0755-33160345
- 郵 箱：3344179313@qq.com
TG1 Electroporation-Competent Cell 產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品規(guī)格
|
TG1 Electroporation-Competent Cell |
50μl×5 |
|
pUC19 (control vector, 10pg/μl) |
10μl |
|
保存條件： |
-80℃ |
基因型
[F? traD36 proAB lacIqZΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB) Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)
產(chǎn)品說明
TG1電擊感受態(tài)細胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。TG1來源于E. coli K-12菌株，是目前生長速度最快的克隆用大腸桿菌菌株，在平板上37℃，7 h可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時也可用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建，lacIqZΔM15的存在使其可以用于藍白斑篩選等實驗；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。TG1電擊感受態(tài)細胞適用于噬菌體展示文庫的構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>0.5×1010 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙
醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中
靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的TG1電擊感受態(tài)細胞插入冰中5 分鐘，待其融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)
并用手撥打EP管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。
A. 測定轉(zhuǎn)化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質(zhì)粒 pUC19；
B. 對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重
懸，DNA濃度不超過100 ng/μl，體積不超過5 μl/50 μl感受態(tài)。
3. 用200 μl槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。
4. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用
電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。
5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入1ml不含抗生素的無菌S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用1ml
槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50 ml離心管（BD Falcon 50 ml錐形離心管等），向離心管中
補加S.O.C. 培養(yǎng)基至10 ml。傾斜45度放入搖床，37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘。
6. 5000 rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C平板上（因菌量較大，
若全部涂板請選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個）。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)13-17小時。
S.O.C 培養(yǎng)基配方
2% Tryptone
0.5% Yeast Extract
10 mM NaCl
2.5 mM KCl
10 mM MgCl2
10 mM MgSO4
20 mM glucose
PH-7.0
S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain
maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983).
注意事項
1. 加入DNA時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。
2. 電擊感受態(tài)細胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會增加弧光放電風(fēng)險。
3. 當(dāng)DNA不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉(zhuǎn)化效率急劇下降。
4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo)，增大在含有細胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風(fēng)險。
5. 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)?；蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
6. 對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，最好轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產(chǎn)物，保證DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電的風(fēng)險。
7. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作，吸取感受態(tài)細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
8. 電擊感受態(tài)細胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率會下降。