產(chǎn)品分類
- ZYMO
- ZYMO
- brand
- 普蘭德
- 美國Beckman Coulter公司
- Allegra X-15R臺式冷凍離心機(jī)
- Allegra 64R高速冷凍臺式離心機(jī)
- Allegra X-30/30R臺式高速離心機(jī)
- Allegra 25R臺式高速冷凍離心機(jī)
- Microfuge12/12R臺式離心機(jī)
- Microfuge 20/20R
- Microfuge 16高速臺式離心機(jī)
- Avanti J-E多用途高效離心機(jī)
- Avanti J-30I高效離心機(jī)
- Avanti J-HC大容量離心機(jī)
- 新一代Avanti JXN-26智能型高效離心機(jī)
- 新一代Avanti JXN-30智能型高效離心機(jī)
- Avanti J-26XP系列高效離心機(jī)
- J6-MI大容量冷凍離心機(jī)
- Optima?XPN超速離心機(jī)
- Optima? XE超速離心機(jī)
- Optima MAX-TL臺式超速離心機(jī)
- Optima? MAX-XP超速離心機(jī)
- Vi-CELL XR細(xì)胞存活率分析儀
- Qiyunbio
- 北京百泰克
- 德國Miccra 公司
- 德國Memmert公司
- 海樂楓公司純水與超純水系統(tǒng)
- 唯地感受態(tài)細(xì)胞
- 測序服務(wù)
- 杭州米歐儀器
- 美國BD公司流式細(xì)胞儀
- 美國Zealway公司高溫高壓滅菌鍋
- 弗德
- 英國Ruskinn公司厭氧、微需氧工作站
- Bugbox 厭氧工作站
- Concept 1000厭氧工作站
- Concept Plus 厭氧工作站
- Concept 400厭氧工作站
- BugBox Plus厭氧工作站
- Concept 400M微需要養(yǎng)工作站
- Bugbox M 微需要養(yǎng)工作站
- Sci-tive Dual 不對稱 活細(xì)胞工作站
- Sci-tive Dual對稱 活細(xì)胞工作站
- Sci-tive NN活細(xì)胞工作站
- Sci-tive N 活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 1000活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 Plus活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 500活細(xì)胞工作站
- INVIVO2 400活細(xì)胞工作站
- Bio-Rad伯樂
- Genstar 產(chǎn)品
- Union 永聯(lián)
- 新加坡ESCO公司生物安全柜、CO2培養(yǎng)箱
- 實(shí)驗(yàn)儀器
- 實(shí)驗(yàn)耗材
- 瑞士Infors公司
- Celltron磁力驅(qū)動
- Thermotron振蕩培養(yǎng)箱
- Minitron-Bacteria振蕩培養(yǎng)箱
- Multitron-Bacteria恒溫振蕩培養(yǎng)箱
- Minitron Cell振蕩培養(yǎng)箱
- Multitron Cell全功能細(xì)胞培養(yǎng)箱
- RC落地?fù)u床
- Multitherm搖床
- Multitron Standard系列搖床
- Ecotron搖床
- Orbitron 搖床
- Labfors 5 Cell細(xì)胞生物反應(yīng)器
- Techfors Cell大型生物反應(yīng)器
- Techfors-S Cell中試原位滅菌生物反應(yīng)器
- Multifors Cell平行生物反應(yīng)器
- Labfors Lux Cell光照發(fā)酵罐
- Minifors Cell細(xì)胞發(fā)酵罐
- Minifors Bacteria實(shí)驗(yàn)臺式發(fā)酵罐
- Labfors 5 Bacteria 實(shí)驗(yàn)發(fā)酵罐
- Labfors Lux光照發(fā)酵罐
- Multifors Bacteria 平行發(fā)酵罐
- Techfors-S Bacteria中試型發(fā)酵罐
- Terrafors Bacteria固態(tài)樣品發(fā)酵罐
- Techfors大型發(fā)酵系統(tǒng)
- X-Controlle發(fā)酵體系控制系統(tǒng)
- CELLine膜培養(yǎng)瓶
- 實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
- 武漢優(yōu)爾生 cloud-clone ELISA kit
- CST
- Omega
- Abcam
- 常用試劑
- Abmart 抗體
- 阿拉丁
- Fermentas
- Invitrogen
新聞中心
聯(lián)系我們
- 地 址：深圳市南山區(qū)西麗街道九祥嶺工業(yè)區(qū)
- 電 話：13006636686，13751058447，0755-33160345
- 傳 真：0755-33160345
- 郵 箱：3344179313@qq.com
F-TOP10快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品規(guī)格
F-TOP10： 10×100μl
pUC19（control vector）：10pg/μl 10μl
保存條件：-80℃
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Strr)endA1 nupG
產(chǎn)品說明
TOP10菌株來源于MC1061，是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞之一，基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型，而TOP10為galU型)。TOP10生長速度快，37℃，10小時可見克隆。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取?？捎糜跇?gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)。
F-TOP10感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內(nèi)完成轉(zhuǎn)化、涂板操作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1~5×108 cfu/μg DNA。
快速轉(zhuǎn)化操作方法 (10min)
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱
2. F-TOP10感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的2YT或LB培養(yǎng)基上。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。
快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法 (25min,可提高轉(zhuǎn)化效率)
1. F- TOP10感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動會降低轉(zhuǎn)化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 復(fù)蘇10分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。
3. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。
注意事項(xiàng)
1. F-TOP10快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞也可進(jìn)行熱激操作，對于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建，為了提高轉(zhuǎn)化效率可按以下步驟操作：F-TOP10感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，插入冰中，5分鐘后，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB，37℃，200 rpm復(fù)蘇30分鐘，涂板。
2. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率，混入目的DNA時應(yīng)輕柔操作。
3. F- TOP10快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可按熱激轉(zhuǎn)化操作，增加孵育步驟。