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F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞產品說明書

產品規(guī)格

F-DH5α:                                                         10×100μl

pUC19(control vector):  10pg/μl                          10μl

保存條件：-80℃ 

基因型

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA 

產品說明

DH5α菌株是實驗室最常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。

F-DH5α感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內完成轉化、涂板操作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1~5×10 ⁸cfu/μg DNA。

 快速轉化操作方法 (10min)

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預熱。

2. F-DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

3. 用200 μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水漬。

4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。

 快速熱激轉化操作方法 (25min,可提高轉化效率)

1. F-DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動會降低轉化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 復蘇10分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。

3. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15h。

注意事項

1. F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞也可進行熱激操作，對于>7 kb質粒的構建，為了提高轉化效率可按以下步驟操作：F-DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，插入冰中，5分鐘后，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB，37℃，200 rpm復蘇30分鐘，涂板。

2. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率，混入目的DNA時應輕柔操作。

3. F-DH5α快速轉化感受態(tài)細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質粒的轉化效率，可按熱激轉化操作，增加孵育步驟。