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F-BL21(DE3) Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品規(guī)格
F-BL21(DE3): 10×100μl
pUC19(control vector): 10pg/μl 10μl
保存條件：-80℃
基因型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)
產(chǎn)品說明
BL21(DE3)菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于BL21的染色體上，所以稱為BL21(DE3)。可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。
F-BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內(nèi)完成轉(zhuǎn)化、涂板操作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×107 cfu/μg DNA。
快速轉(zhuǎn)化操作方法（10min）
1. 提前10分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. F-BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置5分鐘。
3. 用200 μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
1. F-BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘（晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率）。加入700 μl不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 復(fù)蘇10分鐘，涂板（均勻，表面無水漬）。
3. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)
1. F-BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞也可進(jìn)行熱激操作，對(duì)于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建，為了提高轉(zhuǎn)化效率可按以下步驟操作：感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，插入冰中，5分鐘后，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置10分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB，37℃，200 rpm復(fù)蘇30分鐘，涂板。
2. F-BL21(DE3) 快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時(shí)效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對(duì)菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可按熱激轉(zhuǎn)化操作，增加孵育步驟。