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一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 50 次 （DP4021） 100 次 （DP4022） 200 次 （DP4023） 抽提液 室溫 50 ml 100 ml 200 ml 蛋白酶 K（溶液 A） -20℃ 20 mg 20 mg×2 20 mg×4 溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml 溶液 B 室溫 10 ml 20 ml 40 ml 蛋白沉淀液 室溫 30 ml 60 ml 120 ml 溶液 C 4℃(一個月） -20℃(長期) 25 ml 50 ml 100 ml 溶液 D 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 結(jié)合液 DB 室溫 25 ml 50 ml 100 ml 去蛋白液 PE 室溫 25 ml 50 ml 100 ml 漂洗液 WB 室溫 15 ml 25ml 50 ml 第一次使用前按說明加指定量乙醇 洗脫緩沖液 EB 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 純化柱 室溫 50 套 100 套 200 套 吸附柱 AC 室溫 50 套 100 套 200 套 本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。 注意事項 1． 溶液 B 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 65℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢 復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 2． 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應及時蓋 緊蓋子。 二、原理簡介 獨特的抽提和裂解體系迅速裂解細胞（壁）和滅活細胞內(nèi)核酸酶，不需 要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組 DNA 的完整性，經(jīng)過特殊處理的純化 柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸，極大的提高了 DNA 的純度，用本試劑盒快速 簡便（1 小時內(nèi)）提取基因組 DNA 純度極高，適合做 PCR 等下游反應。 三、試劑盒特點 1． 經(jīng)過特殊處理的純化柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸。 2． 兼容性強，適用于各種不同的淤泥、糞便以及其他 soil. 3． 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。 4． 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在 60 分鐘內(nèi)完成。 5． 高純度，OD260/OD280典型的比值達 1.7～1.9，長度可達 50kb 以上， 可直接用于 PCR，Southern-blot 和各種酶切反應。 四、注意事項（實驗前必須首先閱讀這部分?。? 1． 所有的離心步驟均可在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13，000 rpm 的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。 溶液 B 低溫容易形成沉淀，可在 65℃水浴幫助溶解。 2． 請自備 70%乙醇 3．樣品必須是新鮮采樣或保存于-80℃，樣品不能常溫保存時間過長。 【百泰克生物】定貨熱線：010－62951781，85640667 Email:info@bioteke.com 【百泰克生物】定貨熱線：010－62951781，85640667 Email:info@bioteke.com -5- －2－ 五、操作步驟 a．準確稱量 0.1--0.3g 的新鮮樣品到干凈的離心管中，加入 1ml 的抽提液，加 入 10ul 的蛋白酶 K 和 50ul 的溶菌酶，Vortex 2-3 分鐘，至到顛倒混勻離心管 時，土樣不會聚在管底或輕彈即可散開，充分混勻后 37℃水浴 20 分鐘（水浴時， 每隔 1-2 分鐘震蕩混勻，使土樣均勻散開，不聚在管底為好）。 b．加入 200ul 溶液 B，Vortex 2-3 分鐘，充分混勻后 65℃水浴 10 分鐘（水浴 時，每隔 1-2 分鐘震蕩混勻，使土樣均勻散開，不聚在管底為好）。 c．13000rpm 離心 10 分鐘取上清至新的 1.5ml 離心管。 d. 加入 1/2 體積的蛋白沉淀液，充分顛倒混勻。 e. 冰浴 8 分鐘，13000rpm 離心 10 分鐘取上清。 f.在上清液加入 500ul 的溶液 C，充分顛倒混勻。 g.將步驟 f 得到的混合液加入到純化柱中, 10000rpm 離心 1 分鐘過濾,收集下濾 液（下濾液含有 DNA）。混合液體積大，應該分兩次過濾。 h. 準確估計下濾液的體積，加入 0.6 倍體積的異丙醇，充分混勻，13000 rpm 離心 10 分鐘，小心倒掉上層懸液，沉淀倒扣吸水紙 2 分鐘。 i.用 100ul 溶液 D 充分溶解沉淀，加入 5 倍體積的結(jié)合液 DB，上下顛倒混勻， 將混合液倒入吸附柱中，靜置 1 分鐘，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。 j.在吸附柱中加入 500ul 的去蛋白液 PE，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。 k. 在吸附柱中加入 700ul 的漂洗液 WB，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。在吸 附柱中加入 500ul 的漂洗液 WB，13000rpm 離心 1 分鐘，棄下液。將吸附柱重新 放回套管中，13000rpm 離心 3-4 分鐘。 l.將吸附柱轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管中，在吸附柱的中間加入 30-50ul 的洗脫 緩沖液 EB，13000rpm 離心 1 分鐘洗脫 DNA，可立即用于下游分子生物學實驗或 -20℃保存。