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一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 50 次 （DP4031） 100 次 （DP4032） 200 次 （DP4033） 抽提液 室溫 50 ml 100 ml 200 ml 蛋白酶 K （溶液 A） -20℃ 10 mg 20 mg 20 mg×2 溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml 溶液 B 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 蛋白沉淀液 室溫 18 ml 36 ml 72 ml 溶液 C 4℃(一 個月） -20℃ (長期) 25 ml 50 ml 100 ml 洗脫緩沖液 EB 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 純化柱 室溫 50 個 100 個 200 個 收集管 （2ml） 室溫 50 個 100 個 200 個 本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。 注意事項 1． 溶液 B 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 65℃水浴幾分鐘幫 助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 2． 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化， 各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。 3． 蛋白酶 K 加水溶解至終濃度為 20mg/ml。 二、原理簡介 獨特的抽提和裂解體系迅速裂解細胞（壁）和滅活細胞內核酸酶， 不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組 DNA 的完整性，經(jīng)過特殊 處理的純化柱能有效的去除雜質和腐殖酸，極大的提高了 DNA 的純度， 用本試劑盒快速簡便（1 小時內）提取基因組 DNA 純度極高，適合做 PCR 等下游反應。 三、試劑盒特點 1． 經(jīng)過特殊處理的純化柱能有效的去除雜質和腐殖酸。 2． 兼容性強，適用于各種不同的土壤、糞便以及其他 soil. 3． 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。 4． 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在 60 分鐘內完成。 5． 高純度，OD260/OD280典型的比值達 1.7～1.9，長度可達 23kb 左右，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各種酶切反應。 四、 注意事項（實驗前必須首先閱讀這部分！） 1.所有的離心步驟均可在室溫完成，使用轉速可以達到13,000 rpm 的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。 2.溶液 B 低溫容易形成沉淀，可在 65℃水浴幫助溶解。 五、操作步驟 a．準確稱量 0.3--0.5g 的新鮮土到干凈的離心管中，加入 1ml 的抽 提液，加入 10μl 的蛋白酶 K 和 50μl 的溶菌酶，渦旋 1-2 分鐘，充 分混勻后 37℃水浴 15 分鐘（每隔 2-3 分鐘劇烈震蕩混勻）。 b．加入 100μl 溶液 B，渦旋 1-2 分鐘，充分混勻后 65℃水浴 10 分 鐘（每隔 2-3 分鐘劇烈震蕩混勻）。 c．10,000rpm 離心 10 分鐘取上清至新的 1.5ml 離心管。 d. 加入 1/3 體積的蛋白沉淀液，充分顛倒混勻。 e. 冰浴 8 分鐘，13,000rpm 離心 10 分鐘取上清。 f. 純化柱的處理：在純化柱中間加入 500μl 的溶液 C，靜置 1 分鐘， 10,000 rpm 離心過濾 30s，棄濾液。此步是為了增加柱子過濾雜質 及腐殖酸的能力。 g. 將步驟 e 得到的上清液加入到處理過的純化柱中,低速離心 （4000rpm 左右）過濾,收集下濾液（下濾液含有 DNA）至新的 1.5ml 離心管中。 h. 準確估計下濾液的體積，加入 0.6 倍體積的異丙醇，充分混勻， 13,000 rpm 離心 10 分鐘，小心倒掉上層懸液，倒扣離心管 2 分鐘晾 干，最后用 30μl 洗脫緩沖液 EB 溶解沉淀即可。(注：如果沉淀還 不是很干凈，還可以用 70%乙醇洗滌沉淀兩次，每次加入 1ml，最 后用洗脫緩沖液 EB 溶解)。