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一、原理簡(jiǎn)介 百泰克獨(dú)特配方的植物 DNA 抽提液（添加多種針對(duì)植物特點(diǎn)的多糖、 多酚去除成份）迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，只需一步離心即可去除 多糖、多酚和蛋白，取上清所得基因組 DNA 用異丙醇沉淀，再通過(guò)乙醇漂 洗等步驟得到純凈的 DNA。 二、注意事項(xiàng)（實(shí)驗(yàn)前必須首先閱讀這部分！） 1． 所有的離心步驟均在室溫完成，使用離心力可以達(dá)到13,000rpm的高 速離心機(jī)。 2． 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前將需要的試劑水浴先預(yù)熱到 65℃?zhèn)溆?，RNase A （10mg/ml）請(qǐng)自備，TE 或者無(wú)酶水請(qǐng)自備。 3． 不同來(lái)源的植物組織材料中提取的DNA 的量會(huì)有差異，一般100mg 新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。 4． 可以按比例放大提取的體系。 三、操作步驟 * 將 DNA 提取試劑放置在 65℃預(yù)熱。 1． 加熱 DNA 提取試劑到 65℃。 2． 取 50-100 mg 植物新鮮組織或 30 mg 干重組織在研缽中加入液氮充 分碾磨成細(xì)粉，或用研磨儀研磨（可以加入預(yù)熱的 DNA 提取試劑研 磨）。 3． 轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個(gè) 1.5 ml 離心管中，加入 1ml~1.2ml 預(yù)熱好的 DNA 提 取試劑，再加入 10 μl RNase A 劇烈渦旋振蕩混勻 1 分鐘，65℃水浴 30 分鐘（有些樣品 10 分鐘即可）。 4． 將離心管轉(zhuǎn)入離心機(jī)中 13,000 rpm 室溫離心 3 分鐘。 下面有兩種抽提方法： 無(wú)酚氯仿提取法： a． 小心吸取 800ul 上清到一個(gè)新的 2ml 離心管，注意不要吸到界面物 質(zhì)，加入 1.2ml 異丙醇混合均勻，13,000 rpm 離心 2 分鐘（板式離心機(jī) 4000g 的離心力也可以沉淀）。 b． 小心倒掉上清，注意不要倒掉沉淀，（如果溶液分成三層，用槍小 心吸去上層溶液，留下下層與中間層）加入 1ml 的 70%乙醇震蕩漂 洗 DNA，13,000 rpm 離心 2 分鐘沉淀 DNA，棄上清。 c． 用槍盡可能吸取多余的乙醇（注意不要將沉淀的 DNA 吸走），室溫 晾 2 分鐘左右使乙醇揮發(fā)，加入 100 μl TE 溶解 DNA?？赡軙?huì)有部 分沉淀無(wú)法溶解，可以離心后取上清。 d． DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20℃。 酚氯仿提取法（不推薦）： 1. 轉(zhuǎn)移第 4 步 800ul 上清到一個(gè)新的 1.5 ml 離心管，加入等體積 的酚：氯仿：異戊醇=25：24：1 的混合液，渦旋振蕩 1min，室 溫放置 5min。 b． 小心吸取上清到一個(gè) 2 ml 離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)，與 等體積異丙醇混合均勻，13,000 rpm 離心 2 分鐘。 c． 小心倒掉上清，加入 1ml 的 70%乙醇漂洗 DNA，13,000 rpm 離 心 2 分鐘。 d． 重復(fù)步驟 c。 e． 用槍盡可能吸取多余的乙醇，室溫 2 分鐘左右使乙醇揮發(fā)，加 入 100 μl TE 溶解 DNA。 f． DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20℃。