少妇一晚三次一区二区三区,终极强奸之兽性诱惑,挺进朋友人妻的后菊,被灌满精子的波多野结衣

產(chǎn)品說(shuō)明：

     本試劑盒是高靈敏度、高特異性擴(kuò)增cDNA 5’末端全長(zhǎng)的試劑盒。使用RT-PCR方法擴(kuò)增目的DNA時(shí)，一般很難得到全長(zhǎng)的cDNA片段，在基因工程研究中，分析遺傳基因的全長(zhǎng)cDNA序列十分重要。RACE法能有效解決這一問題。Bioteke 5’-Full RACE Kit能夠通過(guò)已知的cDNA序列，高靈敏度、高特異性地?cái)U(kuò)增cDNA的5’末端的全長(zhǎng)序列。本試劑盒通過(guò)RNA反轉(zhuǎn)錄酶與靶RNA的已知序列互補(bǔ)的引物引導(dǎo)合成第一鏈cDNA ，第一鏈cDNA的3’末端在通過(guò)末端轉(zhuǎn)移酶使之同聚物加尾；這種合成的同聚物存在于mRNA 5’未知序列的上游并提供了一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)，擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物能克隆至T載體上。在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行幾個(gè)樣品的反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液（Master Mix），然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。用于cDNA合成的溶液試劑盡可能的DEPC進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí)，首先用經(jīng)過(guò)滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌處理?？蛻粜枳詡湓噭o(wú)水乙醇，基因特異性引物，PCR用相關(guān)試劑。

 

注意事項(xiàng)：

◆ 進(jìn)行5′RACE實(shí)驗(yàn)時(shí)，為提高RACE結(jié)果的可信度，應(yīng)同時(shí)M-MLV（-）的負(fù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)。M-MLV（-）即：5′RACE Adaptor連接反應(yīng)后進(jìn)行RT反應(yīng)時(shí)不添加M-MLV，如果M-MLV（-）的負(fù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)沒有特異性擴(kuò)增，說(shuō)明5′RACE結(jié)果來(lái)源于mRNA。

◆ 同時(shí)進(jìn)行幾個(gè)樣品的反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液（Master Mix），然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。

 

問題解答：

1．Total RNA使用量是否可以增減？

可以。Total RNA使用2μg 時(shí)擴(kuò)增效果較好，1μg時(shí)擴(kuò)增稍弱。推薦RNA模板使用量為2μg 。

2． RT-PCR反應(yīng)時(shí)何時(shí)需要將RNA預(yù)變性？

RNA立體結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，RNA不預(yù)變性時(shí)沒有得到理想結(jié)果時(shí)需要將RNA預(yù)變性。

3． 5′RACE擴(kuò)增的電泳結(jié)果出現(xiàn)多種條帶，為什么？

原因可能是：擴(kuò)增的基因?yàn)槎嗷蚣易宓某蓡T； 已知序列信息有限，導(dǎo)致PCR擴(kuò)增特異性差；mRNA 5′端剪切、拼接方式不同。