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技術(shù)介紹

長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)是指長度在200~100000 nt之間不具有蛋白編碼功能的RNA分子。 它們存在帶polyA尾和不帶polyA尾兩種形式，具有跨物種的低保守性，組織特異性表達(dá)和豐度低等特點。lncRNA的種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過編碼RNA，保守估計哺乳動物基因組序列中4%~9%的序列產(chǎn)生lncRNA轉(zhuǎn)錄本，而相應(yīng)的蛋白編碼RNA的比例僅是1%~5%。目前研究提示lncRNA的功能機制主要包括參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、蛋白質(zhì)運輸和mRNA降解。lncRNA已經(jīng)成為非編碼RNA研究領(lǐng)域的一個熱點，借助高通量測序，研究人員能夠快速獲得與疾病或者特定生物學(xué)過程相關(guān)的lncRNA并進(jìn)行深入研究。

技術(shù)優(yōu)勢

1） 信息完善：去rRNA的建庫方法，使得一個文庫可以同時進(jìn)行lncRNA和mRNA的分析，節(jié)省了實驗成本；
2） 精確度高：鏈特異性建庫方法，使得反義lncRNA的鑒定更加準(zhǔn)確；
3） 前瞻性好：能發(fā)現(xiàn)大量未知的lncRNA信息，適合各類物種的研究；
4） 完整性：獲取最完整的lncRNA轉(zhuǎn)錄信息。

2、技術(shù)路線

3、樣品要求

1）樣品類型：細(xì)胞、新鮮組織或RNA樣品。

2）樣品量：細(xì)胞樣品請?zhí)峁┲辽?span>1×10⁷個細(xì)胞，組織樣品請?zhí)峁┲辽?span>300mg的組織塊或切片，RNA樣品請?zhí)峁?span>2 μg以上的總RNA。

3）樣品質(zhì)量：RNA無明顯降解，提取的總RNA OD260/280值在1.8~2.2之間，濃度≥ 500 ng/μl，28S:18S ≥ 1.5，RIN ≥ 7。

4）樣品保存：細(xì)胞樣品或新鮮組織塊（切成~50mg的小塊）可用TRIZOL或RNA保護劑處理或液氮凍存后，-80℃保存。RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存。樣品保存期間避免反復(fù)凍融。

5）樣品運輸：樣品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰運輸。