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一、試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 50 次 （DP4601） 100 次 （DP4602） 200 次 （DP4603） 抽提液 室溫 50 ml 100 ml 200 ml 蛋白酶 K -20℃ 10mg 20mg 20mg×2 溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml 溶液 B 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 蛋白沉淀液 室溫 18 ml 36 ml 72 ml 溶液 C 4℃(一個(gè)月） -20℃(長期) 25 ml 50 ml 100 ml 洗脫緩沖液 EB 室溫 5 ml 10 ml 20 ml 純化柱 室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè) 收集管（2ml） 室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè) 本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。 注意事項(xiàng) 1． 溶液 B 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 65℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢 復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 2． 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋 緊蓋子。 3． 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)自備異丙醇、70%乙醇。 二、原理簡介 獨(dú)特的抽提和裂解體系迅速裂解細(xì)胞（壁）和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，不需 要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組 DNA 的完整性，經(jīng)過特殊處理的純 化柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸，極大的提高了 DNA 的純度，用本試劑盒 快速簡便（1 小時(shí)內(nèi)）提取基因組 DNA 純度極高，適合做 PCR 等下游反應(yīng)。 三、試劑盒特點(diǎn) 1． 經(jīng)過特殊處理的純化柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸。 2． 兼容性強(qiáng)，適用于各種不同的樣品糞便以及其他 soil. 3． 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。 4． 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在 60 分鐘內(nèi)完成。 5． 高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá) 1.7～1.9，長度可達(dá) 50kb 以上， 可直接用于 PCR，Southern-blot 和各種酶切反應(yīng)。 四、注意事項(xiàng)（實(shí)驗(yàn)前必須首先閱讀這部分?。? 1． 所有的離心步驟均可在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13，000 rpm的 傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。 溶液 B 低溫容易形成沉淀，可在 65℃水浴幫助溶解。  五、操作步驟 a．準(zhǔn)確稱量 0.2--0.4g 的新鮮樣品到干凈的離心管中，加入 1ml 的抽 提液，加入 10ul 的蛋白酶 K 和 50ul 溶菌酶，渦旋 1-2 分鐘，充分混 勻后 37℃水浴 15 分鐘（每隔 2-3 分鐘劇烈震蕩混勻）。 b．加入 100ul 溶液 B，渦旋 1-2 分鐘，充分混勻后 65℃水浴 10 分鐘 （每隔 2-3 分鐘劇烈震蕩混勻）。 c．10,000rpm 離心 10 分鐘取上清至新的 1.5ml 離心管。 d. 加入 1/3 體積的蛋白沉淀液，充分顛倒混勻。 e. 冰浴 8 分鐘，13,000rpm 離心 10 分鐘取上清。 f. 純化柱的處理：在純化柱中間加入 500ul 的溶液 C，靜置 1 分鐘， 10,000 rpm 離心過濾 30s，棄濾液。此步是為了增加柱子過濾雜質(zhì)及 腐殖酸的能力。 g.將步驟 e 得到的上清液加入到處理過的純化柱中,低速離心 （4000rpm 左右）過濾,收集下濾液（下濾液含有 DNA）至新的 1.5ml 離心管中。 h. 準(zhǔn)確估計(jì)下濾液的體積，加入 0.6 倍體積的異丙醇，充分混勻， 13,000 rpm 離心 10 分鐘，小心倒掉上層懸液，小心倒扣離心管 2 分 鐘晾干，最后用 30ul 洗脫緩沖液 EB 溶解沉淀即可。(注：如果沉淀 還不是很干凈，還可以用 70%乙醇洗滌沉淀兩次，最后用洗脫緩沖 液 EB 溶解)。