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產(chǎn)品展示
產(chǎn)品描述:
獨(dú)特的裂解/結(jié)合液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后基
因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過
一系列快速的漂洗-離心的步驟, 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝
物,蛋白等雜質(zhì)去除, 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅
基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品組成:
試劑盒組成 保存
50 次
(DP7121)
100 次
(DP7122)
溶液 A -20℃ 1 ml 1 ml×2
緩沖液 TC 室溫 15 ml 30 ml
結(jié)合液 CB 室溫 13 ml 26 ml
抑制物去除液 IR 室溫 27 ml 50 ml
漂洗液 WB 室溫
15 ml 25ml
第一次使用前按說明加指定量乙醇
2
洗脫緩沖液 EB 室溫 15 ml 20 ml
微量吸附柱 室溫 50 個 100 個
收集管(2ml) 室溫 50 個 100 個
操作流程:
1.將石蠟組織切成 4~10 μm 厚的薄片,用滅菌小鑷子將切片放入 1.5ml
離心管中,組織的量在 20mg 左右。
2.加入300ul緩沖液TC,渦旋混勻后90℃水浴30min,以修復(fù)甲醛變性
的核酸,時間不可過長,<一小時,若溶液TC出現(xiàn)沉淀,在溫水中
溶解之后再使用。
3.室溫靜置2min,13,000rpm離心2min,小心吸取石蠟塊下液體和組
織約250μl到一新EP管。
4.加入20μl溶液A,渦旋震蕩10 s,55℃水浴1h,期間震蕩混勻幾次,
直至組織完全消化,溶液澄清(可以適當(dāng)延長時間)。
5. 10000rpm離心2min,取上清轉(zhuǎn)入一新EP管中。
6.加入250μl 結(jié)合液CB和250μl 無水乙醇,劇烈顛倒充分混勻。
7.上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱中,(吸附柱放入收
集管中)10,000 rpm離心30秒,倒掉收集管中的廢液。
8. 加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000 rpm 離心 30 秒,棄廢液。
9. 加入 700μl 漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm
離心 30 秒,棄掉廢液。
10. 加入 500μl 漂洗液 WB,12,000 rpm 離心 30 秒,棄掉廢液。
11. 將微量吸附柱放回空收集管中,13,000 rpm 離心 2 分鐘,盡量除去
漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
12. 取出微量吸附柱,放入一個干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位
加 15~50μl 洗脫緩沖液 EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)
熱), 室溫放置 3-5 分鐘,12,000 rpm 離心 1 分鐘。將得到的溶
液重新加入離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12,000 rpm 離心
1 分鐘。
洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要 DNA 濃度較高,可以適當(dāng)減少
洗脫體積, 但是最小體積不應(yīng)少于 15μl,體積過小降低 DNA 洗脫效率,
減少 DNA 產(chǎn)量。
13. DNA 可以存放在 2-8℃,如果 11111 要
長時間存放,可以放置在-20℃。